CDCの新しい感染検査－それは再びPCR検査

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CDCはこれまでのPCR検査を廃止するが、これからの検査もPCR検査になる

(図 Covid-19 Pixabay)

米国の各紙が報じたCDCのPCR検査廃止。彼らネイティブ・スピーカーですら誤解をするような、わかりにくい発表をした理由は何なのでしょうか。

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2021/08/07更新診断テスト

2021/10/06更新インフルエンザとSARS-CoV-2のマルチプレックス・アッセイ

2021/08/07更新診断テスト

CDCは、COVID-19の原因となるウイルスのSARS-CoV-2を特定する2つの臨床検査を開発しました。 2020年2月にリリースされたCDCが配布したCOVID-19診断の最初の検査は、CDC 2019－新型コロナウイルス（2019-nCoV）リアルタイムRT-PCR診断パネル(CDC 2019-Novel Coronavirus (2019-nCoV) Real-Time RT-PCR Diagnostic Panel)という、呼吸器検体中のSARS-CoV-2を正確に検出する検査です。 CDCは、2020年7月に2番目のアッセイであるCDC インフルエンザSARS-CoV-2 (Flu SC2) マルチプレックス・アッセイ(CDC Influenza SARS-CoV-2 (Flu SC2) Multiplex Assay)をリリースしました。これにより、公衆衛生研究所は1回の反応で3つの検査を実行できます。インフルエンザSC2マルチプレックス(Flu SC2 Multiplex)は、検査試薬の使用においてより効率的であり、より高いスループットを可能にし、同時に、患者検体中のSARS-CoV-2、インフルエンザA型、とインフルエンザB型の核酸の存在について正確な結果を提供します。 COVID-19とインフルエンザの症状は似ている可能性があるため、3つのウイルスすべてを同時に検査することは、不足しているリソースを節約しながら、コミュニティでのこれらのウイルスの拡散を減らすために必要な情報を公衆衛生当局に提供します。

注意：CDCは、2021年末にCDC 2019-nCoVリアルタイムRT-PCR診断パネルを廃止します。詳細については、以下のCDC 2019-nCoVリアルタイムRT-PCR診断パネルのセクションを参照してください。

CDCのインフルエンザSARS-CoV-2マルチプレックス・アッセイ

CDCの最新の臨床検査では、2種類のインフルエンザウイルス(A型とB型)とSARS-CoV-2を同時に検出します。この検査は、CDC インフルエンザSARS-CoV-2 (Flu SC2) マルチプレックス・アッセイと呼ばれます。

これらのウイルスの1つまたは複数による現在の感染を診断する単一の検査により、公衆衛生研究所は、SARS-CoV-2の検査も行っている間、インフルエンザの監視を継続できます。両方のウイルスに関する情報は、公衆衛生当局が地域社会におけるインフルエンザとCOVID-19の蔓延を制御するのに役立ち、医療提供者が同時感染を特定し、インフルエンザとCOVID-19のより的を絞った治療を提供するのに役立つ可能性があります。別々のSARS-CoV-2検査とインフルエンザ検査を実行する必要はなく、単一の検査でこの情報を取得することはまた、ラボが不足している重要な検査材料を節約し、CDC 2019-nCoVリアルタイムRT-PCR診断パネルと個別のインフルエンザ診断検査で可能な検査の最大3倍の検査を処理できるようにします。

Flu SC2マルチプレックス・アッセイは、試験が意図したとおりに機能することを確認するために、発売前にCDC研究所と他の3つの公衆衛生研究所で評価されました。 Flu SC2マルチプレックス・アッセイは、最初の検査が設計されたときに利用できなかったSARS-CoV-2ゲノムに関するデータを使用して設計されました。これは、元のCDC 2019-nCoVリアルタイムRT-PCR診断パネルと比較して、SARS-CoV-2ウイルスの検出を改善し得ます。

米国食品医薬品局(U.S. Food and Drug Administration、FDA)は、2020年7月2日に、インフルエンザSC2マルチプレックス・アッセイを使用するための緊急使用許可(Emergency Use Authorization、EUA)の外部アイコン(external icon)を発行しました。 EUAプロセスの外部アイコンにより、FDAは、公衆衛生上の緊急事態の間、未承認の命を救う可能性のある医療や診断製品の使用を検討と許可をすることができます。米国保健福祉長官(U.S Secretary of Health and Human Services)は、2020年1月31日、SARS-CoV-2を米国の公衆衛生上の緊急事態であると宣言しました。

CDC 2019-nCoV RT-PCR診断パネル

2020年2月3日、CDCはEUAパッケージを提出し、米国でFDAが許可したCDC 2019-nCoVリアルタイムRT-PCR診断パネルの使用を促進しました。 FDAは翌日EUAを発行し、CDCは検査キットを州および地方の公衆衛生研究所に送付しました。

(Fig.1) CDCのSARS-CoV-2用ラボ検査キットの箱

CDCは、CDC 2019-nCoVリアルタイムRT-PCR診断パネルを開発および配布して、他にFDAが承認または許可したCOVID-19診断がなかった時代のギャップを埋めました。 CDCの最初の検査が開発されて以来、SARS-CoV-2検査のための多くの市販のオプションが承認されています。 CDC 2019-nCoVリアルタイムRT-PCR診断パネルは、2020年初頭に開発および展開されたときに満たされていない重要なニーズを満たしましたが、この検査の需要は、SARS-CoV-2と他の一般的な呼吸器病原体の両方を同時に検出する高スループットの代替手段と多重化アッセイの承認により減少しました。このため、CDCは2021年12月31日以降、2019-nCoVリアルタイムRT-PCR診断パネルを廃止します。

検査がまだとても上手く機能しているとして、CDCは、CDC 2019-nCoVリアルタイムRT-PCR診断パネルで使用されるプライマーとプローブの設計を、他の人が自分の研究活動や診断アッセイの開発に使用できるように、CDCのウエブサイトで引き続き利用できるようにします。 CDCはまた、独自のFDA規制申請でCDCデータを参照することを希望するすべての人に、診断パネル用のCDC EUA ’EUA200001) を参照する包括的な権利を提供し続けます。診断パネルを中止するというCDCの決定と、それに続く診断パネルのEUAの撤回は、EUA提出でCDCEUAデータを参照した検査や将来参照する予定の検査には影響を与えません。データと提出物はFDAに保管され、参照できるようになります。

CDCは、公衆衛生研究所(public health laboratories、PHL)がCDCインフルエンザSARS-CoV-2 (Flu SC2)マルチプレックス・アッセイを採用して、インフルエンザとSARS-CoV-2の両方を効率的に監視できるようにすることを奨励しています。これにより、PHLの時間とリソースの両方が節約されます。 IDTまたはBioSearchから購入したCDC認定材料を使用してCDCのEUAの下で検査を行っていた臨床検査室は、別のFDA認定検査に移行することをお勧めします。もしも、臨床検査室がインフルエンザ診断を実施するのならば、CDCは、臨床検査室がSARS-CoV-2とインフルエンザA型とB型の結果を提供できるFDA認定検査の1つを検討することを推奨します。

誰がこれらの検査を使用できますか

CDCの検査は、インフルエンザの検出に使用される同様のタイプの検査を実行できる資格を以前に持っていたか、または最近SARS-CoV-2検査に対して州の公衆衛生研究所により承認された、米国の州や地方の公衆衛生研究所と国防省の研究所に提供されます。

追加リソース

Information for Laboratories
SARS-CoV-2 Viral Culturing at CDC
CDC’s Diagnostic Test for COVID-19 Only
CDC’s Diagnostic Multiplex Assay for Flu and COVID-19
Testing Data in the US
Overview of Testing for SARS-CoV-2 (for healthcare providers)
Testing for COVID-19 (for the public)

----- 出典 -----

www.cdc.gov

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(図 Mask Pixabay)

2021/10/06更新インフルエンザとSARS-CoV-2のマルチプレックス・アッセイ

CDCインフルエンザSARS-CoV-2 (Flu SC2)マルチプレックス・アッセイは、リアルタイム逆転写ポリメラーゼ連鎖反応(real-time reverse-transcription polymerase chain reaction RT-PCR)検査です。これは、上気道または下気道の検体で、SARS-CoV-2、インフルエンザA型ウイルス、およびインフルエンザB型ウイルスからのRNAを検出して区別します。このアッセイは、感染の急性期にある患者からの検体を評価するための、高感度の核酸(nucleic-acid)ベースの診断ツールを提供します。

CDC FluSC2マルチプレックス・アッセイの利点の詳細[上記]をご覧ください。

米国食品医薬品局(US Food and Drug Administration、FDA)は、2020年7月2日に、この検査の緊急使用許可(Emergency Use Authorization、EUA)を付与しました。

CDC Flu SC2マルチプレックス・アッセイFDA認定の使用説明書外部アイコン(external icon)には、検査とその使用目的、検査手順、および検査パフォーマンス特性に関する情報が含まれています。 CDC Flu SC2マルチプレックス・アッセイのFDA承認書の外部アイコンは、EUAウエブサイトの外部アイコンにあります。この書簡は、CDCおよびこの試験を使用する他の試験所に適用される許可された使用および許可の条件を定義しています。 CDC Flu SC2マルチプレックス・アッセイのパフォーマンス・データを参照する権利に関心のあるメーカーと検査開発者は、これらのFAQを読むことをお勧めします。

2020年11月20日、FDAは、検査用のサンプルを準備するために使用できる抽出機器のリストを拡張するために、CDC FluSC2マルチプレックス・アッセイの修正外部アイコンをEUAに付与しました。この修正に含まれるもの：

4つの自動核酸抽出機器オプションの追加
- QIAcube HT
- KingFisher Flex
- MagNAピュア・コンパクト
- NucliSENS® easyMAG®
標準の7500Fast DxキャリブレーションでInfB信号を表示するには、VICフィルターの代わりにJOEフィルターを使用することをお勧めします
検証手順と希釈の明確化

2021年1月8日、FDAは、抽出機器のリストを拡張するために、CDC FluSC2マルチプレックス・アッセイの修正外部アイコンをEUAに付与しました。これは、検査用のサンプルを準備したり、検査で使用するプライマーおよびプローブ試薬の認定メーカーを追加したりするために使用できます。この改正により、より多くのラボが自動化された高スループットの検体調製装置で検査を使用できるようになり、検査の速度とスループットが向上する可能性があり、2番目の認定メーカーを追加することでプライマーとプローブ試薬の製造能力が向上します。この修正に含まれるもの：

2つの自動核酸抽出機器オプションの追加
- Maxwell®RSC48
- Maxwell®CSC48
CDC FluSC2マルチプレックス・アッセイで使用するためのプライマーおよびプローブ試薬の別の認定メーカーの追加

2021年7月21日、FDAは、CDC Flu SC2マルチプレックス・アッセイのEUAに修正を承認しました。米国や世界的に流通しているSARS-CoV-2ウイルス/変異体の利用可能なゲノム配列に対するアッセイのプライマー/プローブ配列のイン・シリコ分析(in silico analysis)を更新するためです。

公衆衛生研究所がCDC FluSC2マルチプレックス・アッセイを注文する方法

CDCの国際試薬リソース(International Reagent Resource、IRR)外部アイコンは、IRRに登録された州や地方の公衆衛生研究所にマルチプレックス・キットを提供します。 IRRは、臨床医、病院、または医療専門家に検査キットを直接提供しません。

COVID-19のパンデミックの間、州の公衆衛生研究所は、州内の郡かまたは市の研究所に検査の実施を許可することができます。これらの検査室は、高度な複雑さの検査を実行するために、臨床検査改善の修正(Clinical Laboratory Improvement Amendments、CLIA)の下で認定されている必要があります。CLIAは、適切な実験装置とトレーニングを備えており、IRRに登録された実験室としてのステータスを維持するために、州の実験室の管理下でテストの熟練度を示しています。この検査で使用するための市販のプライマーとプローブのリストは、現時点では入手できません。ただし、CDCはプライマーとプローブの配列仕様を共有しているため、他の研究所や企業が独自の試薬を製造している場合があります。

アッセイに含まれる材料

CDC Flu SC2マルチプレックス・アッセイは、以下を含むフォー・イン・ワンのアッセイです：

1つのプライマー・ミックスと1つのプローブ・ミックス。プライマーとプローブのターゲット：
- SARS-CoV-2を特異的に検出するためのウイルス・ヌクレオカプシド(N)遺伝子
- A型インフルエンザウイルスを特異的に検出するためのマトリックス(M1)遺伝子
- B型インフルエンザウイルスを特異的に検出するための非構造2(NS2)遺伝子
- 内部対照として機能するヒト核酸の特異的検出のためのRNase P遺伝子(RP)
ポジティブ・コントロール：SC2PCと季節性インフルエンザのポジティブ・コントロール(Seasonal Influenza Positive Control、SIPC)。これらは、アッセイの4つのターゲットすべてが正しく機能していることを一緒に確認します。

アッセイを実行するために必要な他の材料

CDC Flu SC2マルチプレックス・アッセイでは、検査に含まれていない追加の認可された材料を使用する必要があります。これらの材料には、マイクロ遠心分離機、マイクロ遠心分離管、ピペット、ピペット・チップなどの実験室で一般的に使用されるRT-PCR試薬、機器、および消耗品が含まれます。材料は、承認されたCDC FluSC2マルチプレックス・アッセイの使用説明書に記載されています。 2つの管理資料も必要ですが、提供されていません。これらのコントロール材料は、CDC Flu SC2マルチプレックス・アッセイの使用説明書に概説されているように、テストが有効であると見なされるために期待される結果を生成する必要があります。コントロールは次のとおりです：

ヒト検体コントロール(Human specimen control、HSC)：核酸の回収の成功、および抽出試薬の完全性を実証するための抽出手順コントロールとして使用されるヒト細胞培養調製物。 HSCの許容可能な代替品は、使用説明書に記載されています。
テンプレート・コントロールなし(No template control、NTC)：各実行にヌクレアーゼ・フリーの水が含まれています。このコントロールは、試薬とシステムの汚染を監視します。

Flu SC2マルチプレックス・アッセイに関するその他のリソース

インフルエンザSC2マルチプレックス・アッセイのファクト・シート

COVID-19とインフルエンザの診断検査に関するその他のリソース